Потужні можливості нашої лабораторії ПЛР дають поштовх до розвитку та збільшення кількості ТКМ

Знайомтесь, на першому фото — Оксана Рядінська, пацієнтка обласного гематологічного центру та її лікарка Лариса Ногаєва, лікар-гематолог.

Нещодавно нашій пацієнтці успішно здійснили пересадку клітин від неродинного, але повністю сумісного донора. Донора для трансплантації кісткового мозку знайшли в Іспанії. Життєву історію харків’янки, пані Оксани ми покажемо у сюжетах регіональних телевізійних медіа згодом. Сьогодні ж спілкуємося з медичним персоналом, який забезпечує унікальну можливість проведення трансплантацій у нашому закладі.

− Ми обстежили дочку пацієнтки, та вона, на жаль, не підійшла. Тож матеріал хворої було надіслано в Український реєстр донорів кісткового мозку, а згодом до Міжнародного банку донорів кісткового мозку, − розповідає Лариса Ногаєва, лікар-гематолог обласного лікувально-діагностичного гематологічного центру.

— Саме завдяки тому, що в Черкаському клінічному центрі онкології, гематології, трансплантології та паліативної допомоги є сучасна лабораторія, усі дослідження проводилися на місці. А це заощаджує час, який потрібен на вчасне лікування.

На базі онкологічного центру було проведено HLA-типування низького ступеня дослідження, на основі нього зробили висновок, що донька не підходить. Але коли родичі підходять по низькій роздільній здатності, тоді на нашій базі можемо робити дослідження високої роздільної здатності HLA-типування. Це робиться для того, щоб мати чітке розуміння, що донори повністю співпадають за всіма показниками.

Лабораторний центр закладу акредитований відповідно до вимог ДСТУ EN ISO 15189:2015 «Медичні лабораторії. Вимоги до якості та компетентності» та виконує дослідження, які закривають потреби діагностики відповідно до клінічних протоколів та лабораторний супровід лікування пацієнтів. Це має велике значення, адже є унікальна можливість робити всі дослідження в одному закладі. що прискорює роботу медиків, лікування пацієнта та заощаджує кошти. Тому ми можемо робити більшу кількість трансплантацій кісткового мозку. Також це дає можливість нам приймати хворих із апластичною анемією з усієї України. А для них теж дуже важливо мати донора, адже пересадка дає повне одужання такого пацієнта. Тобто людина з таким діагнозом може із своїми рідними пройти обстеження й визначити, чи підходять вони як донори, − розповідає пані Лариса.

Нині, завдяки нашому лабораторному обладнанню, ми вже готуємо до родинної трансплантації кісткового мозку двох пацієнтів, яким повністю підійшли клітини рідних. Набуваємо досвіду, розвиваємось, постійно рухаємось вперед.

Завідувачка лабораторії Лариса Рудакова провела нам екскурсію у ПЛР-лабораторії й розповіла, чим вона є унікальною та які дослідження тут проводять. Лабораторія ПЛР (полімеразної ланцюгової реакції), яка працює нині, створювалась протягом 2020-2021 року.

У ПЛР-лаборатії, крім HLA-типування, виконуються дослідження донорів, реципієнтів, онкопацієнтів на низку інфекцій.

− У 2021 році у нашому закладі цільовим направленням від МОЗ України було встановлено обладнання для ПЛР-дослідження у режимі реального часу. Це обладнання дозволяє проводити молекулярно-генетичні дослідження, що є основним методом проведення типування рецепієнтів і донорів, тобто HLA-типування високого ступеня здатності. Для пересадки кісткового мозку задля ідентифікації донора та реципієнта потрібно саме HLA-типування високого ступеня здатності, − зазначає Лариса Рудакова.

У спеціалізованому приміщенні, що відповідає всім вимогам таких установ, яке складається із трьох відокремлених боксів, ми побачили унікальне для Черкащини, та й не лише нашого регіону, обладнання.

Варто зазначити, що ще донедавна такі дослідження проводились лише у столиці, в Охматдиті.

До екскурсії приєднується і лікарка-біологиня Юлія Гайденко, яка безпосередньо нині на робочому місці займається дослідженнями інфекцій.

До слова, у цій лабораторії працюють два лікарі-біологи. Юлія Гайденко має спеціалізацію клінічна лабораторна діагностика і вірусологія. А її колега Наталія Джирма спеціалізується із медичної генетики. Нині вона на стажуванні в клініці Ізраїльського університету Хадасса в Єрусалимі. Наші фахівці постійно у процесі навчання, стажування, ознайомлення з новими досягненнями тощо. Інакше, зазначають, не можна працювати належно.

Переодягаємось, знайомимось із обладнанням та слухаємо його функціональне призначення.

− Прилад для проведення ПЛР у реальному часі необхідний для швидкого генетичного HLA-типування зразку 1 пацієнта за один цикл ампліфікації (одна плашка певного формату ампліфікується за один цикл) з отриманням результатів по 11 HLA локусам. Аналіз методом SSP (алель-специфічні праймери) real-time ПЛР відповідає базовому (середньому) рівню роздільної здатності. Даний аналіз вкрай необхідний за параметрами швидкості, точності для проведення екстренних типувань у випадках нічних трупних трансплантацій, де фактор часу без втрати якості є вкрай важливим, — зазначає пані Юлія, − а от ампліфікатор потрібен при проведенні типувань з високою роздільною здатністю. Використовується метод rSSO (алель-специфічні олігонуклеотиди) на основі полімерних часток з нанесеними олігонуклеотидами певної нуклеотидної специфіки. Ампліфікатор дозволяє досліджувати необхідну кількість зразків одночасно.

У Юлії Гайденко світяться очі, коли вона, з любов’ю до своєї професії та свого місця роботи, розповідає нам про ці технології та можливості. Щоби стати належним фахівцем та вміло працювати у цій лабораторії має бути вища базова освіта лікаря, біолога, а також необхідно пройти не одні спеціалізовані курси підготовки.

Ми познайомились із спектрофлуориметром, що має високу чутливість (0,2 до 100 нг) у 100 зразках) та необхідний для розрахунку кількості виділеного зразку ДНК та подальшої калькуляції її додавання у суміш мастер-міксу.

Побачили сучасну центрифугу з ротором для планшетів, що необхідна для осаджування малої кількості доданих об’ємів для усунення бульбашок у планшетах ПЛР, кращого перемішування реакційної суміші у планшеті, запобігання розкидів між лунками. Також плашкова центрифуга є невід’ємним приладом пробо-підготовки зразків, а саме для осадження бідсів перед кожним етапом промивки для усунення їх втрати.

Система для генетичного HLA-типування у комплекті з програмним забезпеченням необхідна для фінального зчитування та аналізу результатів HLA-типування. Крім того, дана система необхідна для проведення передтрансплантаційного скринінгу та посттрансплантаційного моніторінгу донор-специфічних антитіл, дозволяє проводити молекулярно-генетичне типування високої роздільної здатності (до 11 локусів одночасно!), що є обов’язковим для трансплантації кісткового мозку. Інші методи, крім NGS (секвенування наступного покоління) та капілярного секвенування, не можуть забезпечити відповідну роздільну здатність. Паралельно, дана система застосовується для імунологічного скринінгу HLA-зв’язаних та незалежних антитіл до трансплантації кісткового мозку та моніторингу антитіл після трансплантації кісткового мозку (особливо неродинної), а також моніторингу імунного статусу.

Звісно, що тут є набори реагентів, що необхідні для виконання молекулярно-генетичного типування та серологічних досліджень донорів і реципієнтів в рамках трансплантації солідних органів та кісткового мозку. Стоять мега-сучасні холодильні та морозильні камери для збереження як медикаментів, так і ДНК.

Цього місяця, за словами лікаря-біолога Юлії Гайденко, вже провели 20 HLA-типувань.

Вражає атмосфера лабораторії. Тут відчувається високий рівень фаховості спеціалістів, надсучасний рівень обладнання, мега-відповідальне ставлення до своїх обов’язків всього медичного персоналу.

І ми вкотре чітко зрозуміли, що наш клінічний онкологічний центр зайняв провідну позицію з ТКМ у державі лише завдяки поєднанню всіх складових: надсучасне обладнання, високий рівень фаховості гематологів та лаборантів, належне адміністрування, і, безумовно, відданість своїй професії кожного, хто тут працює.